qEV Columns (SEC) 胞外體提取管柱
符合 ISO 13485:2016 品質規範 | 15 分鐘內完成 | 完整保留原始活性 | 洗脫後可重複使用
qEV Columns 胞外體提取管柱 (qEVoriginal / qEV1 /qEV10 column 已開始全新發售 Gen 2 型號)
近年來, 胞外體/細胞外囊泡 (Extracellular vesicles, EVs) 的研究越來越引起相關生物學者的關注, 因為它們可擔任細胞間訊息傳導的角色: 包含免疫調節、細胞的活化與凋亡誘導以及在疾病狀態下的改變, EVs 的內容物有胞外體(Exosomes, 胞泌體、外泌體)、微囊泡、外吐小體、胞外小體等。
因此, 如何提取和分析高含量與高純度的 EVs 就變成一個必要的過程 (Exosomes/EVs isolation)。
傳統的純化提取方法
使用高速離心法 (UC) 或沉澱原理的試劑組 (Precipitation Reagent Kits) 常會遇到一些問題, 比如高速離心過程很花時間, 在 20,000g 的作用力下常會破壞囊泡或使囊泡團聚而影響後續的分析, 而使用密度梯度離心法 (Density gradient centrifugation, DGC) 會需要很昂貴的設備也很費時; 目前市面上的沉澱原理的試劑組通常是基於 PEG 原理而對沉積胞外體有選擇性, 相關文獻指出這些試劑的成分仍可能會引起蛋白質、脂蛋白和其他生物成分的共沉澱現象出現。
SEC 尺寸排阻色譜法
Size Exclusion Chromatography
qEV Columns 胞外體提取管柱是基於 SEC (Size Exclusion Chromatography) 尺寸排阻色譜法, 又名凝膠排阻法(Gel Filtration) - 可提供快速簡單而精準有效的胞外體提取方式, 以自然滴落的方式在15分鐘內即可提取完整的胞外體純樣, 比採用傳統的高速離心 (UC) 或沉澱試劑 (Precipitation Reagent Kits) 的提取方法更加純淨、簡單、快速、精確而無損的提取胞外體, 更適合後續的蛋白組學分析。
qEV Columns 依照原始樣品體積的不同已經有 5 個型號 (100µL - 100mL), 每個型號都有35奈米和70奈米兩種孔徑可以選擇, 可完全覆蓋您的原始樣品類型, 使用 PBS 或是其他生理緩衝液洗脫後可重複使用。
現在, qEV 還可以選擇全球第一的自動提取裝置 (AFC, Automatic Fraction Collector), 有效消除人為操作的實驗誤差風險。
各種適用的生物樣品
血清
血漿
唾液
尿液
細胞培養基 / 腦脊隨液 / 生物反應器
可移除>99%的可溶性蛋白, 超高純度無污染背景
使用 qEV original 滴入0.5 mL 血漿的典型洗脫曲線
生產過程品質可靠, 全球唯一
符合 ISO 13485:2016 規範
qEV is now the Gold Standard for exosome/EV isolation
qEV Columns 規格
1. 樣品注入體積 : 100 µL- 100 mL
2. 操作溫度 : 15-25 ºC (室溫)
3. 滴定流速 : 一般為 0.8-1.2 mL/min (18 ºC)
4. 通過的最小顆粒 : 35 nm / 70 nm (2種尺寸)
5. 通過的最大顆粒 : 1 µm
6. 頂端和底部的過濾器尺寸 : 20 µm
7. 可穩定運作的 pH 值範圍 : 3-13
8. 可穩定再生的 pH 值範圍 : 2-14
9. 初次使用前的保值期 : 1 year
10. 初次使用後的保值期 : 依使用和保存狀態而定, 建議3個月內
※ 全新改良型的 Agarose resin 填充的 "Gen 2" 型號的columns 已開始發售, 可大幅提升回收率與純度
如何選擇您的 qEV Columns 胞外體提取管柱?
第一步 : 依原始樣品的體積 (Sample Loading) 選擇適合的型號
qEVsingle - Legacy最大樣品體積(Sample Loading): 100-150 µL (20支/盒, 建議單次使用); 如為細胞上清液原樣, 可由<15 mL 以下的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEVoriginal - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 500 µL (5支/盒, 洗脫後可重複使用); 如為細胞上清液原樣, 可由15-100 mL的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEV1 - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 1 mL (5支/盒, 洗脫後可重複使用); 如為細胞上清液原樣, 可由50-200 mL的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEV2 - Legacy
最大樣品體積(Sample Loading): 2 mL (2支/盒, 洗脫後可重複使用); 如為細胞上清液原樣, 可由100-300 mL的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEV10 - Gen2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 10 mL (1支/盒, 洗脫後可重複使用); 如為細胞上清液原樣, 可由300-1000 mL的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEV100 - Legacy
最大樣品體積(Sample Loading): 100 mL (1支/盒, 洗脫後可重複使用); 如為細胞上清液原樣, 可由4-5 L的體積濃縮(100 kDa concentrator)
qEVsingle: 150 µL
qEVoriginal: 500 µL
qEV1: 1 mL
qEV2: 2 mL
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qEV10: 10 mL
qEV100: 100 mL
第二步 : 選擇適合的孔徑 (35nm or 70nm)
回收的粒徑範圍
qEV-35nm: 35-350nm
qEV-70nm: 70-1000nm
備註: qEV-35nm 可收集到更小的粒徑; qEV-70nm 可收集的粒徑範圍較廣泛
回收的集中區域
qEV-35nm: EV<110nm
qEV-70nm: EV>110nm
備註: qEV-35nm 在110nm以下的粒徑回收率較好; qEV-70nm 在110nm以上的粒徑回收率較好
脂蛋白覆蓋率
qEV-35nm>qEV-70nm
備註: qEV-70nm雜蛋白濃度優於qEV-35nm
初次使用的流速
qEV-35nm<qEV-70nm
備註: qEV-70nm時間優於qEV-35nm
qEV-35nm 提取的沖提曲線
qEV-70nm 提取的沖提曲線
qEV Rack
胞外體手動提取專用支架
1. 簡化 qEV Columns 的設置和準備過程
2. 提取時可方便的監控管柱的緩衝液面高度
3. 可方便的將餾分收集管和廢液儲存管定位在管柱下
4. 可一次運行多個 qEV Columns
5. 適用於 qEV Single 和 qEV Original 兩種型號
AFC-V2, Automatic Fraction Collector
胞外體自動提取機
1. 全觸控螢幕操作, 方便而標準的自動化提取過程
2. 全機 LED 燈號提示, 可避免人為操作誤差具有高度重複性
3. 高精度的體積收集量, 每個餾分可被精確的秤重而得知體積
4. 高輸出量, 系統可以平行的運作, 自動識別所有型號的 qEV Columns
Q & A:
1. 使用 qEV Columns 提取 Exosome/EVs 時需要做離心的動作嗎?
Ans: 採用 SEC 尺寸排阻色譜法的 qEV Columns 在使用時不需要做離心的動作; 只需注意在提取前要先將樣品進行兩次步進的低速離心 - 1,500g/10mins, 再將上清液移至新EP管後再使用 10,000g/10mins 以去除大的粒子和細胞碎屑後即可注入 qEV Columns 以自然滴落的方式提取 Exosome/EVs 的餾分(fractions)
2. qEV Columns 需要怎麼保存呢? 期限是多久?
Ans: qEV Columns 保存時要在4度C冷藏 (不可冷凍), 只需注意要放入 PBS Buffer 不要乾涸即可; 新管柱的保存期限約12個月而使用後的管柱約3個月左右
3. 我的樣品體積很大(ex: 細胞上清液), 該使用何種 qEV Columns 呢?
Ans: 現在 qEV Columns 的型號最高已可達 100 mL 樣品量 (qEV100), 如果要使用 AFC 自動提取的最大樣品體積則為 qEV10 (10 mL)
關於細胞上清液(Cell Culture Media)的原始體積量範圍可達4-5L, 只需先使用100 kDa濃縮管(或TFF)預先縮小體積, 相關實驗流程請參閱實驗應用專區-如何從細胞上清液内提取高純度的細胞外囊泡
更多的相關訊息, 歡迎和我們聯絡或來信洽詢: info@normanda.com
qEV Columns(SEC) 的原理介紹影片
qEV Columns(SEC) 自動提取示範影片
