ISOLATING EVs FROM BLOOD PRODUCTS USING qEV

提取血液樣品中胞外體的建議與要點 [原廠YT介紹和示範短片請見頁底]

胞外體/細胞外囊泡(EVs)是由多種活化和凋亡的細胞所產生的膜衍生物的廣泛分類。
EVs的分類包含外泌體(exosomes)、微囊泡(microvesicles, 有時稱為microparticles微粒) 、脂質體(oncosomes)和其他囊泡(vesicles), 由其細胞來源、粒徑和表面標記物來定義。
他們被用來在細胞間傳遞訊息, 而其用來將分子轉運到特定的靶細胞群的功能使他們在診斷和預後的發展更具吸引力, 提取EVs的主要生物流體的代表物是血液(Blood), 而其在分析前的階段(樣品收集)可能是變異的重要來源。
這有很大的程度上是由於血細胞, 尤其是血小板(platelets)可以很容易被活化并在樣品採集和處理的過程中釋放EVs。
血小板可以在一般的血液處理過程中所使用的許多分子和條件下活化, 因此, 重要的是所使用的樣品收集和處理方案必須注意
（A）防止血小板活化（B）在儲存和分析前去除血小板
<注意事項和建議>
EVs分佈的檢測和表徵通常會與樣品處理和提取過程中產生的人爲產生物混肴; 採集的過程會改變分子完整性、功能和(或)生物標本的組成, 因此必需特別注意所選擇評估的樣品介質(全血、血漿或血清)、采血與處理的方法。

樣品的介質

樣品介質的種類在EVs分析研究的設計上是一個重要的考量點, 然而有些EVs的研究會使用全血進行, 此介質會阻礙EVs的提取和儲存, 所以應用的數量被限制了。
血清和血漿是主要使用的樣品種類, 由於以下因素所以血漿比血清更適合作爲EVs的來源--

1. 當準備血清時, 多餘的EVs會在血塊形成過程中釋出

2. 血清中的囊泡數量會高於血漿

3. 採集后所釋放的由血小板所衍生的EVs可能會是血清中大量EVs的原因

血液的採集

採集的條件會很大的影響血液樣品中EVs分佈的數量和表徵。
採集的變異例如儲存溫度、運送狀態、儲存時間、抗凝劑(anticoagulant)和離心的方案都要在所有的樣品中維持一致, 因爲這可能會影響已處理樣品内的EVs數量。

1. 最好在早上時由空腹的患者上採集。
2. 靜脈穿刺的過程中可能會活化血小板; 應丟棄前1-3 mL採集的血液因其會有止血帶的壓力的活化效應和成纖維細胞的污染。
3. 最好不要對溶血樣品中的EVs進行測量, 如果要包含溶血樣品, 則要仔細解釋包含溶血程度在内的測量結果。
4. 抗凝血劑的選擇可能會影響到下游的應用, 如左表所示--

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