關於 Automatic Cell Counter (自動細胞計數儀)

Automatic Cell Counter

自動細胞計數儀

細胞計數 (cell counting) 在大多數的生物實驗中是一個基礎的步驟, 其為了要減少下游結果的變異和錯誤, 標準化的細胞濃度就可能會是必要的。
近年來, 自動細胞計數儀因其沒有手動操作的血細胞計數板 (hemocytometer) 的缺點而變得非常普遍, 然而 automatic cell counter 還是有難以克服的缺點。
大部分以影像為基底的自動細胞計數儀會捕捉影像後藉由成像技術來提供結果, 其中一個典型的問題就是在計算塊狀 (clumpy) 細胞時可能會有非常錯誤的計算

 

驗證方法

NanoenTek, Inc. 所發佈的 EVETM PLUS 就是用以克服以上儀器所遇到的問題, 使用最先進的光學技術結合先進的影像分析演算以解決問題
使用 EVETM PLUS 和其他的自動細胞計數儀做團聚細胞計數(clumped cell counting)的比較如表1。
準備8個貼壁細胞系和2個懸浮細胞系, 使用 EVETM PLUS 來測定其密度; 在貼壁細胞系中有4個是屬於團聚類型。
細胞核染色的細胞計數的線性測試
使用手動的方法來比較計數結果的線性會出現很大的誤差和變異而不適合, 所以應該使用更準確的計數方法來比較, 例如細胞核細胞計數 (ADAM-MC2)。
為了要確認在細胞核染色計數與 EVETM PLUS 的之間的線性, 要先準備高濃度的細胞並進行系列稀釋, 在此使用使用一個單細胞 (single cell, Jurkat cell) 和一個團聚細胞 (clumped cell, SCC 2.2 cell) 

 

使用 ADAM-MC2 儀器進行細胞核染色細胞計數
NanoenTek 所發佈的 ADAM-MC2 是另一型的自動細胞計數儀, 其基於使用 Propidium Iodide (PI) 螢光染劑以染色哺乳類細胞PI 是一個普遍的紅色螢光核與染色體複染劑, 由於其不能滲透到活細胞中, PI 也廣泛用於偵測死細胞
為了得到正確的計數結果, ADAM-MC2 提供了兩種染色方法: AccuStain Solution T 包含 PI & 裂解液可用來得到總細胞計數; AccuStain Solution N 包含 PI & PBS 可用來得到非活性的細胞計數。

結果

細胞核染色計數儀的線性測試結果

使用單一的序列稀釋處理兩個高濃度不同型態的細胞來比較 EVETM PLUS 和 ADAM-MC2 (細胞核染色計數儀)的線性測試結果。
在每個細胞型態的測試中, 其得到的測量值與線性細胞密度以 R2 值都密切相關

這證明了 EVETM PLUS 可提供單細胞和團聚細胞正確的結果。

 

與其他細胞計數儀比較細胞計數結果

在比較了 EVETM PLUS 和其他品牌的細胞計數測試表現時, 以 ADAM-MC2 測試的結果為標準。細胞的濃度已經處理成客戶主要使用的程度, 十種細胞被依照類型區分成兩個群體。
依照結果來看, EVETM PLUS的表現是最接近細胞核染色細胞計數的結果也在所有的細胞中有最低的 CV 值。

結論

EVETM PLUS 表現的最優異的原因為:

  • 與細胞核染色細胞計數的結果最相近

  • 對於團聚細胞系(clumped cell)的計數結果是最佳選擇

  • 與其他品牌相比結果最優

  • 選擇手動聚焦時只需要1秒就完成

  • 選擇自動聚焦時可保證結果的重複性

  • 在大部分的細胞系中都可產生最正確的結果

  • 通過高端的算法得到低 CV 值

  • 相對實惠的一次性耗材

  • 自動存檔達500筆資料